【SN商检标准】 化肥中三聚氰胺含量的测定高效液相色谱法和离子色谱法

SN
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4378—2015
化肥中三聚氰胺含量的测定
高效液相色谱法和离子色谱法
Determination of melamine in fertilizer-High performance liquid chromatography and ion chromatography2015-12-04发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
涂层连
2016-07-01实施
发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。SN/T4378—2015
本标准主要起草人：孙明星、邱丰、蔡婧、闵红、王文青、屠虹、赵雨薇、张继东、沈国清，1
1范围
化肥中三聚氰胺含量的测定
高效液相色谱法和离子色谱法
SN/T4378—2015
本标准规定了化肥中三聚氰胺含量的两种测定方法，即第一法高效液相色谱法和第二法离子色谱法。其中第一法高效液相色谱法为仲裁方法。本标准适用于复合肥、复混肥、缓释肥及其他氮磷钾肥料中三聚氰胺含量的测定。其中高效液相色谱法测定含量范围为0.5mg/kg~3000mg/kg，离子色谱法测定含量范围为5.0mg/kg~10mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样经氨水甲醇水溶液提取。提取液振荡、离心后，取上清液氮气吹干，重新溶解定容，采用高效液相色谱进行检测，外标法定量。试样经三氯乙酸溶液提取，提取液振荡、离心，取上清液经阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干后溶解定容，注入配有电导检测器的离子色谱仪检测，外标法定量。注：试样中三聚氰胺质量分数含量在5.0mg/kg～3000mg/kg范围时，高效液相色谱法和离子色谱法都可以用于测定。
4试剂和材料
除非另有规定，均使用分析纯试剂，实验用水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：色谱纯。
4.1
4.2
乙：色谱纯。
4.3
4.4
庚烷磺酸钠：色谱纯。
甲基磺酸：色谱纯。
柠檬酸。
4.5
4.6
4.7
4.8
4.9
氨水：含量为25%28%。
三氯乙酸。
三聚氰胺标准品，纯度大于99.9%，CAS号：108-78-1。三氯乙酸溶液（1%）：称取10g三氯乙酸（4.7）于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。
4.10
氨水甲醇水溶液：量取20mL氨水（4.6），70mL甲醇（4.1）和10mL纯水，混勾。使用前配制。4.11
液相色谱流动相：称取2.02g庚烷磺酸钠（4.3）和2.10g柠檬酸（4.5）于1L容量瓶中，加人1
SN/T4378—2015
150mL乙睛（4.2）.用水溶解并稀释至刻度。4.12离子色谱淋洗液：称取0.29g甲基磺酸（4.4)于1L容量瓶中，加人150mL乙腈（4.2），用水溶解并稀释至刻度。
4.13标准储备液：称取1g（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品（4.8），用纯水溶解定容于1L容量瓶中，配制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。4.14标准中间液：吸取标准储备液（4.13)10mL，于100mL容量瓶内，用纯水定容至100mL，该溶液三聚氰胺浓度为100mg/L。
4.15高效液相色谱标准工作溶液：用移液管分别移取标准中间液（4.14）1.0mL、5.0mL、10mL、25mL、50mL于5个100mL容量瓶内，用液相色谱流动相（4.11)定容至100mL，该溶液三聚氰胺浓50mg/l。于4℃冰箱内贮存，有效期1周。度分别为1.0mg/L、5.0mg/L、10-mg/l.24.16离子色谱标准工作溶液：由三聚氰胺标准中间液（4.14)和标准储备溶液（4.13)用离子色谱淋洗液/L.5.0mg/L.10mg/L.20mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L一系(4.12）稀释至0.5mg/L、1.0mg
列浓度的标准工作溶液。于4℃冰箱内贮存，有效期1周。4.17有机相滤膜：0.45μm。
4.18阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg.3mL.或相当者
5仪器和设备
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
5.6
5.7
5.8
5.9
高效液相色谱仪：配有紫外检测器离子色谱仪：配有数字型电导检测器循环往复振荡器：转速不低于100/min
超声波清洗器，功率≥100
W
离心机：转速不低于5000/min。固相萃取装置。
具塞试管：可与固相萃取装置以及氮吹仪配套使用。分析天平：感量0.0001%。
氮气吹干仪
6试样制备与保存
取化肥代表性试样约500g，充分捣碎过筛，装人样品瓶中，并标明标记，置于干燥器中。7测定步骤
7.1
第一法：高效液相色谱法
7.1.1提取
称取制备好的化肥试样1g（精确至0.01g），置于100mL锥形瓶中，加入25mL氨水甲醇水溶液（4.10），用循环往复振荡器（5.3)以100r/min高速振荡30min，然后在离心机（5.5）上于5000r/min离心5min。将上清液移人50mL容量瓶中。于残留物中再次加人25mL氨水甲醇水溶液（4.10），重复上述振荡离心操作，将上清液移入上述容量瓶中，用液相色谱流动相（4.11)定容至50mL(V。）。2
7.1.2净化
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取10mL(V,）提取液（7.1.1)于70℃下氮气吹干，准确加人5mL(V.）液相色谱流动相（4.11)充分溶解，过0.45um有机相滤膜（4.17），用高效液相色谱仪测定。7.1.3
测定
7.1.3.1
高效液相色谱参考条件
参考条件如下：
a)
b)
c)
d)
e)
f)
7.1.3.2
色谱柱：Cls柱（5um，250mmX4.6mm）或相当者流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠+0.01mol/L柠檬酸缓冲盐+15%（体积比）乙睛（4.11）。流速：0.8mL/min。
进样量：10μL。
柱温：常温。此内容来自标准下载网
波长：240nm。
定量测定
根据试样中被测物的含量，以保留时间进行定性，选取响应值相近的标准工作液进行分析。以目标化合物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，外标法定量。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，如果含量超过标准曲线范围应用液相色谱流动相（4.11）稀释到适当浓度后分析。在上述色谱条件下，三聚氰胺标准溶液的液相色谱图参见附录A中图A.1。7.1.3.3
空自试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行宁
7.1.4
结果计算和表述
试样中三聚氰胺的含量按式（1)计算，计算结果需扣除空白值。C
式中
X
c
m
V2
K
式中：
Vo
V.
试样中三聚氰胺含量，单位为毫克每千克（mg）kg
从标准曲线上得到的样液中三聚氰胺的浓度，单位为毫克每升（mg/L)；称取的试样质量，单位为克（g）；净化后加入液相色谱定溶液（4.11)的体积，单位为毫升（mL）；样品前处理过程中的稀释倍数，按式（2)计算。V
K=
V
样品提取过程（7.1.1)中加人提取液的总体积，单位为毫升（mL）；样品净化过程（7.1.2）中吸取的提取液的体积，单位为毫升（mL）。计算结果以两次平行试验结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。7.1.5
定量限
本方法对化肥中三聚氰胺的定量限为0.5mg/kg（1)
....(2)
3
SN/T4378—2015
7.1.6精密度
7.1.6.1重复性
同一操作者用同一仪器在相同的实验条件下对同一个样品进行测定，获得的两个连续测定结果之差，不大于这两个测定值的算术平均值的10%。7.1.6.2
2再现性
不同操作者，不同实验室对同一样品，按正常的实验方法进行测定，获得的两个连续测定结果之差，不大于这两个测定值的算术平均值的15%。7.2第二法：离子色谱法
7.2.1提取
称取制备好的化肥试样1g（精确至0.01g），准确加人50mL（V，）三氯乙酸溶液（4.9）。超声5min，用循环往复振荡器（5.3）以100r/min高速振荡30min，然后在离心机（5.5）上于5000r/min离心5min。
7.2.2净化
依次用3mL甲醇，3mL水活化阳离子交换固相萃取柱（4.18），准确移取6mL（V，）提取液（7.2.1）过柱，控制过柱速度在1mL/min以内。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤固相萃取柱，最后用氨水甲醇水溶液（4.10)6mL洗脱，洗脱液收集于具塞试管（5.7)中。将洗脱液置于70℃的氮吹仪（5.9）中吹干，准确加人5mL（V，）离子色谱淋洗液（4.12），过0.45um有机相滤膜（4.17），用离子色谱仪测定。准确移取离心液中三聚氰胺的离心液体积，可以根据三聚氰胺的浓度高低进行调整，应保证移取的离心液中三聚氰胺的量不超过1mg。
7.2.3测定
7.2.3.1
离子色谱参考条件
参考条件为：
a)
色谱柱：分离柱为IonPacRSCSIseparator（4X25Omm）或相当者。保护柱为IonPacRSCS)Guard(4×450mm)或相当者。
b)
淋洗液：3mmol/L甲基磺酸+15%（体积比）乙腈水溶液（4.11）。c)
d)
e)
f)
7.2.3.2
流速：0.9mL/min。
进样量：20μL。
柱温：30℃。
氮气：纯度大于99.99%。
定量测定
根据试样中被测物的含量，以保留时间进行定性，选取响应值相近的标准工作液进行分析。以目标化合物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准上作曲线，外标法定量。标准上作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，如果含量超过标准曲线范围，应用离子色谱淋洗液（4.12)稀释到适当浓度后分析。在上述色谱条件下，三聚氰胺标准溶液的离子色谱图参见附录B中图B.17.2.3.3
空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行结果计算和表述
7.2.4
试样中三聚氰胺的含量按式(3)计算，计算结果需扣除空白值。X,=CXV
m
式中：
X,
ci
m
Vs
K
式中：
XK
试样中三聚氰胺含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；从标准曲线上得到的样液中三聚氰胺的浓度，单位为毫克每升（mg/L)；称取的试样质量，单位为克（g)；SN/T4378—2015
··（3
样品净化（7.2.2)后加入离子色谱定容液（4.13)的体积，单位为毫升（mL）；样品前处理过程中的稀释倍数，按式（4)计算。V3
K=
Vs一一样品提取过程（7.2.1)中加入提取液的总体积，单位为毫升（mL）)；V，—一样品净化过程（7.2.2)中吸取的提取液的体积，单位为毫升（mL）。计算结果以两次平行试验结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。7.2.5定量限
本方法对化肥中三聚氰胺的定量限为5.0mg/kg。7.2.6
精密度
7.2.6.1
重复性
....(4)
同一操作者用同一仪器在相同的实验条件下对同一个样品进行测定，获得的两个连续测定结果之差，不大于这两个测定值的算术平均值的10%。7.2.6.2
再现性
不同操作者，不同实验室对同一样品，按正常的实验方法进行测定，获得的两个连续测定结果之差，不大于这两个测定值的算术平均值的15%。5
SN/T4378—2015
100.00
95.00-
90.00
85.00-
80.00-
75.00-
70.00-
65.00
60.00-
0.0
1.0
2.0
附录A
（资料性附录）
三聚氰胺标准物质的液相色谱图三聚氰胺
西装国
3.0
品品
4.0
5.0
6.0
国
7.0
三聚氰胺标准物质的液相色谱图图A.1
S
TTTTTTT
8.0
9.0
30-
20
10-
0-
0
4
附录B
（资料性附录）
三聚氰胺标准物质的离子色谱图三聚氰胺
6
图B.1
8
10
12
三聚氰胺标准物质的离子色谱图14
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16

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