【行业标准】 进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T0169—2010
代替SN0169—1992.SN0333—1994和SN/T1059.2—2002进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法
Determination of coliform,fecal coliform and Escherichia coliinfoodforimportandexport
2010-11-01发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2011-05-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T0169—2010
本标准代替SN01691992《出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》、SN03331994《出口食品中大肠杆菌（葡萄糖苷酶荧光）检验方法》和SN/T1059.2一2002《进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数滤膜/MUG法》。本标准与SN0169—1992、SN0333—1994和SN/T1059.2—2002相比，主要技术变化如下：将原标准名称《出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》、《出口食品中大肠杆菌（葡萄糖苷酶荧光）检验方法》和《进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数滤膜/MUG法》整合修订为《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》；SN0169—1992标准的范围不变，但SN0333—1994和SN/T1059.2—2002标准的范围有限，因此，本标准将范围进行整合修订：增加了规范性引用文件；
增加了术语和定义；
一一在设备和材料中删掉乳钵和研棒，稀释瓶中增加了“其他适宜的容器”；一对液体样品MPN法的检测修订为：液体样品接种量1mL以上者，用双料月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤；接种量1mL及1mL以下者，则用单料月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤；平板计数法中删去了计算公式；一MPN值表增加了“95%置信区间”。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：付宝莲、刘中学、侯丽萍、高飞。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN0169—1992
—SN0333—1994；
SN/T1059.22002。
1范围
进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法
本标准规定了进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法。SN/T0169—2010
本标准中MPN法适用于进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验；平板计数法适用于进出口食品中大肠菌群的检验：β葡萄糖酶荧光法适用于进出口食品（不包括贝类）中大肠杆菌的检验：滤膜/MUG法适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、饮料、牛奶（需用蛋白酶处理）、单晶糖和椒粒中大肠菌群和大肠杆菌的检验。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
大肠菌群coliform
需氧及兼性厌氧，能在37℃48h分解乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌3.2
粪大肠菌群fecalcoliform
需氧及兼性厌氧，能在44.5℃士0.5℃，24h发酵乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌又可称耐热大肠菌群（thermotolerantcoliformorganisms）。3.3
大肠杆菌Escherichiacoli
需氧及兼性厌氧，能在44.5℃土0.5℃48h分解乳糖产酸产气，生化特征“IMViC”为“十十一一或一十一一”的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌又可称大肠埃希氏菌。4检验方法
4.1原理
4.1.1最可能近似值（mostprobablenumber，MPN）法MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出大肠菌群、粪大肠菌群或大肠杆菌在SN/T0169—2010
待测样品中的最大可能数、
4.1.2平板计数法
大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。
4.1.3β-葡萄糖苷酶荧光法
大肠杆菌中的β-葡萄糖苷酶可降解培养基中4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖苷酸（MUG)，并释放4-甲基伞形酮荧光物质（4-MU），该物质在紫外灯（波长366nm）下会显现蓝色荧光特点。4.1.4滤膜/MUG法
待测样品通过滤膜过滤时，样品中的大肠菌群和大肠杆菌被截留于滤膜表面。将滤膜贴附于LMG或BMA琼脂上培养后，大肠菌群在LMG琼脂上会形成蓝色菌落；而BMA琼脂上的大肠杆菌由于葡萄糖苷降解4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖苷酸（MUG)并释放4-甲基伞形酮形成紫外光（366nm）下为蓝白色荧光的菌落。
4.2培养基与试剂
4.2.1生理盐水：见附录A.1。
4.2.2Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液：见附录A.2。4.2.3月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤（LST）：见附录A.3。4.2.4
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）：见附录A.4。4.2.5大肠杆菌肉汤（EC)：见附录第A.5。4.2.6
伊红美蓝琼脂（EMB）：见附录A.6。结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：见附录A.7。4.2.7
月桂基硫酸盐胰蛋白陈MUG肉汤（LST-MUG）：见附录A.8。4.2.8
Columbia-MUG：见附录A.9。
蛋白陈-吐温80稀释液（PT)：见附录A.10。乳糖莫能菌素葡萄糖酸琼脂（LMG)：见附录A.11。缓冲MUG琼脂（BMA）：见附录A.12三（羟甲基）胺甲烷（Tris)缓冲剂：见附录A.13。营养琼脂斜面：见附录A.14。
色氨酸肉汤：见附录A.15。
MR-VP培养基：见附录A.16。
Korser氏枸橡酸盐肉汤：见附录A.17。4.2.18
Kovacs氏靛基质试剂：见附录A.18。甲基红指示剂：见附录A.19。
VP试剂(VP）：见附录A.20。
革兰氏染色液：见附录A.21。
4.2.22胰蛋白酶贮存液：见附录A.22。4.3设备与材料
4.3.1培养箱：36℃±1℃44.5℃±0.5℃。4.3.2水浴箱：36℃±1℃，44.5℃±0.5℃。2
4.3.3冰箱:0℃~5℃和-15℃~-20℃。4.3.4均质器：涡旋式或拍击式。4.3.5吸管：lmL.具0.1mL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。4.3.6
平皿：直径90mm。
试管：16mm×160mm。
稀释瓶：三角烧瓶、广口瓶或其他适宜的容器。4.3.8
4.3.9玻璃小倒管：长度约20mm。天平：感量0.1g。
显微镜。
菌落计数器。
滤器：备预滤器。
滤膜：有机或水相，孔径0.45μm。5真空泵。
紫外灯：波长366nm。
4.4样品制备
固体或半固体样品
SN/T0169—2010
无菌操作称取样品25g置于装有225mL灭菌稀释剂（4.2.1/4.2.2）的适宜容器中，充分振摇、混匀。或将剪碎后的试样25g置于灭菌的均质杯/袋内，加入225mL灭菌稀释剂，以8000r/min～10000r/min涡旋式均质1min，或以6次/s~9次/s拍击式均质1min，制成1：10的样品稀释液备用。4.4.2液体样品
以无菌吸管吸取样品25mL置于装有225mL灭菌稀释剂的适宜容器中以30cm幅度于7s内振摇25次或机械振荡器中振摇。制成1：10的样品稀释液备用，4.4.3样品稀释
样品稀释液的pH值应在6.5～7.5之间，pH值过低或过高时可分别用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸予以调节。根据对样品污染情况的估计，将4.4.1或4.4.2制成的1：10样品稀释液用9mL灭菌稀释剂进行系列十倍递增稀释，如10-2，10-3，10-4..，直至最高稀释度的检测结果达到阴性终点。每一稀释度换用1支1mL无菌吸管或移液器吸头，上一稀释度用的吸管或吸头不要触及下一稀释度的稀释液。从制备样品稀释液至稀释完毕，全过程不得超过15min。4.4.4样品的酶处理
4.4.4.1一般要求
样品的酶处理可在室温下（23℃～27℃）进行。4.4.4.2固体或半固体样品
无菌操作称取样品25g置于装有225mL灭菌PT稀释液（4.2.10）的适宜容器中，充分振摇、混匀。或将剪碎后的试样25g置于灭菌的均质杯/袋内，加入225mL灭菌稀释剂，以8000r/min～10000r/min涡旋式均质1min，或以6次/s9次/s拍击式均质1min，制成1：10的样品稀释液备用。
SN/T0169—2010
4.4.4.3液体样品
以无菌吸管吸取样品25mL置于装有225mL灭菌PT稀释液的适宜容器中，以30cm幅度于7s内振摇25次或机械振荡器中振摇。制成1：10的样品稀释液备用。4.4.4.4样品稀释
取1：10的酶PT稀释液（胰蛋白酶贮存液：PT稀释液）10mL于4.4.4.1或4.4.4.2制成的1：10样品稀释液中并混匀，置于36℃土1℃水浴中处理20min～30min后，将制成的1：10样品酶处理稀释液用9mL灭菌PT稀释液进行系列十倍递增稀释.如10-2，10-3，10-4...，直至最高稀释度的检测结果达到阴性终点。每一稀释度换用1支1mL无菌吸管或移液器吸头，上一稀释度用的吸管或吸头不要触及下一稀释度的稀释液。从制备样品稀释液至稀释完毕，全过程不得超过45min。4.4.4.5样品过滤
将灭菌过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上并固定。无菌操作加人10mL～20mL无菌蒸馏水于滤器中，打开真空泵，抽吸过滤，再从4.4.4.4中选取适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度分别过滤，每次10mL。最后再加人10mL～15mL无菌蒸馏水，抽吸过滤后，关闭真空泵，用无菌镊子将滤膜取出于4.5.3中备用。4.5大肠菌群的测定
4.5.1MPN法
4.5.1.1从4.4.3中选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度均接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白陈（LST)肉汤，每管接种1mL。液体样品接种量1mL以上者，用双料月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤；接种量1mL及1mL以下者，则用单料月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤。36℃土1℃培养24h～48h后，观察倒管内是否有气泡产生·并记录24h和48h内产气的LST肉汤管数。对未产气管有疑问时，可以轻敲试管壁的方式观察是否有较细小的气泡从管底逸出，如所有LST肉汤管均未产气，可按4.8.1报告结果；如LST肉汤管有产气，则按4.5.1.2作证实试验。4.5.1.2证实试验。用直径3mm的接种环从4.5.1.1中所有24h和48h内发酵产气的LST肉汤管中分别挑取培养液1环，分别移种于煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤管中，于36℃土1℃培养48h土2h，记录所有BGLB肉汤管的产气管数，根据BGLB肉汤的产气管数查MPN表（见附录B.1）并按4.8.1报告结果。
4.5.2平板计数法
4.5.2.1从4.4.3中选取适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种两个灭菌平皿，每皿1mL。另取1mL稀释剂加入一灭菌平皿中，作空白对照。将冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约15mL倾注于每个平皿中，小心旋转平皿，使培养基与样液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3mL～4mL的VRBA均匀覆盖于平板表层，凝固后翻转平皿，36℃士1℃培养18h～24h。4.5.2.2选取菌落数在25个～250个之间的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群菌落。典型大肠菌群菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径约0.5mm或更大。典型和可疑菌落按4.5.2.3作证实试验。
4.5.2.3证实试验。用接种环从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型或可疑菌落，移种于BGLB肉汤管内，36℃土1℃培养24h～48h后观察产气情况。对BGLB肉汤产气者按4.5.2.4计算；对形成4
菌膜的阳性管则应进行革兰氏染色，以便排除革兰氏阳性杆菌SN/T0169-—2010
4.5.2.4将4.5.2.3中证实为大肠菌群阳性的菌落数相加，再乘以稀释倍数，按4.8.2报告结果。4.5.3滤膜/MUG法
以无菌操作将4.4.4.5样品过滤后的滤膜贴放于预先干燥的LMG琼脂平板表面上，滤膜与琼脂表面之间应无气泡。于36℃士1℃培养24h±2h后，选取菌落数在25个～250个之间的平板，计数所有蓝色（包括深蓝或浅蓝色）菌落。将滤膜上的菌落数相加，再乘以其稀释倍数，按4.8.4报告结果。
4.6粪大肠菌群MPN法的测定
用直径为3mm的接种环从4.5.1.1中所有48h土2h内发酵产气的LST肉汤管中分别挑取培养液1环，转种于EC肉汤管中并放置于带盖的44.5℃士0.5℃恒温水浴箱内，培养24h土2h。水浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面。记录EC肉汤管的产气情况，产气管为粪大肠菌群阳性；不产气为粪大肠菌群阴性。根据粪大肠菌群的阳性管数查MPN表（见附录B.1)并按4.8.1报告结果。4.7大肠杆菌的测定
4.7.1MPN法
4.7.1.1培养
将4.6中EC肉汤管在44.5℃土0.5℃恒温水浴箱内继续培养24h土2h后，从产气管中挑取培养液划线接种于伊红美蓝（EMB）平板，36℃士1℃培养24h土2h4.7.1.2检查
检查平板上有无黑色中心、有光泽或无光泽的可疑菌落。用接种针蘸取菌落中心部位并转种于营养琼脂斜面上，36℃士1℃培养18h～24h。4.7.1.3试验
4.7.1.3.1将营养琼脂斜面培养物转种于下列生化培养基中进行试验。4.7.1.3.2色氨酸肉汤：36℃土1℃培养24h土2h后.加Kovacs氏试剂0.2mL～0.3mL，上层出现红色者为靛基质试验阳性，
4.7.1.3.3MR-VP培养基：36℃±1℃培养48h±2h后，无菌操作移取培养物1mL至13mmX100mm试管中，加5%α-萘酚乙醇溶液0.6mL，40%氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶，振摇试管后静置2h，如出现伊红色，为VP试验阳性。将MR-VP培养物的剩余部分继续培养48h后滴加5滴甲基红溶液，如培养物变红则表示甲基红试验阳性；若变黄则甲基红试验阴性。4.7.1.3.4Kovser氏柠檬酸盐肉汤：36℃士1℃培养96h后，观察其生长情况。4.7.1.3.5LST肉汤：36℃土1℃培养48h土2h后，观察其产气情况。4.7.1.3.6革兰氏染色：取营养琼脂斜面培养物进行革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌。
4.7.1.3.7大肠杆菌和非大肠杆菌生化鉴别如下表1，如出现表中以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯，应重新划线分离，必要时做重复试验。5
SN/T0169—2010
靛基质
表1大肠杆菌和非大肠杆菌生化鉴别表MR
柠檬酸盐bZxz.net
鉴定（型别）
典型大肠杆菌
非典型大肠杆菌
典型中间型
非典型中间型
典型产气肠杆菌
非典型产气肠杆菌
4.7.1.3.8大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气，IMViC试验为十十一一或一。根据LST肉汤阳性管数查MPN表（见附录B.1)并按4.8.1报告结果。4.7.2β-葡萄糖苷酶荧光法
4.7.2.1从4.4.3中选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度均接种三管LST-MUG肉汤，每管1mL。于30min内置于36℃土1℃水浴或培养箱内培养24h士2h。将培养后的LSTMUG肉汤管拿至暗室，在长波紫外光灯（波长366nm）下观察。产气显蓝色荧光的为大肠杆菌阳性；产气不显蓝色荧光的按4.7.2.2作证实试验。4.7.2.2证实试验：从4.7.2.1中产气不显蓝色荧光的LST-MUG肉汤管中挑取培养物，划线接种于Columbia-MUG琼脂平板，于36℃士1℃培养24h士2h。将培养后的Columbia-MUG平板拿至暗室，在长波紫外光灯（波长366nm）下观察，凡显蓝色荧光的菌落均为大肠杆菌阳性菌落。4.7.2.3根据4.7.2.1中LST-MUG肉汤阳性管数，和4.7.2.2中Columbia-MUG琼脂平板证实为大肠杆菌阳性的LST-MUG肉汤阳性管数查MPN表（见附录B.1)并按4.8.3报告结果。4.7.3滤膜/MUG法
以无菌操作将4.4.4.5样品过滤后的滤膜贴放于预先干燥的BMA琼脂平板表面上，滤膜与琼脂表面之间应无气泡。放人36℃土1℃培养箱中培养2h，在暗室或紫外操作室内用波长366nmUV灯观察滤膜上的菌落是否有蓝白色荧光。选用菌落数范围在25个～250个之间的平板，计算蓝白色荧光的菌落数并相加，再乘以其稀释倍数后，按4.8.4报告结果。4.8报告结果
4.8.1MPN法
每克（毫升）样品中大肠菌群、粪大肠菌群或大肠杆菌的MPN值（MPN/g或MPN/mL）。4.8.2平板计数法
每克（毫升）样品中大肠菌群数（CFU/g或CFU/mL）。4.8.3葡萄糖苷酶荧光法
每克（毫升）样品中大肠杆菌的MPN值（MPN/g或MPN/mL）。4.8.4滤膜/MUG法
每克（毫升）样品中大肠菌群或大肠杆菌数（CFU/g或CFU/mL）。6
A.1一般要求
附录A
（规范性附录）
培养基与试剂
SN/T0169-—2010
为保证培养基的质量，应按SN/T1538.1和SN/T1538.2进行培养基的制备与性能测试。若使用商售的脱水合成培养基，应选用通过ISO9000质量体系认证的国内外生产厂商的产品并按其说明进行制备和使用。
A.2生理盐水
氯化钠
蒸馏水
将氯化钠溶于蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。A.3Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液A.3.1贮存液
磷酸二氢钾（KH,PO）
蒸馏水
将磷酸二氢钾溶于蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠约175mL调至pH7.2。用蒸馏水加至1000mL贮存于冰箱。
A.3.2稀释液
取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于合适的容器后，121℃高压灭菌15min。A.4月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤（LST）胰蛋白陈或胰酪陈（Trypticase）氯化钠
磷酸氢二钾（K,HPO4）
磷酸二氢钾（KH,PO）
月桂基硫酸钠
蒸馏水
将各成分溶解于蒸馏水中。分装到有倒立发酵管的20mmX150mm试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。最终pH6.8土0.2。双料培养基除蒸馏水不变外，其余成分加倍。7
SN/T0169—2010
A.5煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
蛋白陈
牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液0.1%煌绿水溶液
蒸馏水
将蛋白陈乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL（将20.0g脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中），用蒸馏水稀释到975mL，调pH7.4。再加人0.1%煌绿水溶液13.3mL，用蒸馅水补足到1000mL，用棉花过滤后，分装到20mmX150mm试管（管内有倒立的小发酵管）中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。最终pH7.2士0.1。A.6EC肉汤
胰蛋白陈或胰酪陈
3号胆盐或混合胆盐
磷酸氢二钾（K,HPO,）
磷酸二氢钾（KH,PO）
氯化钠
蒸馏水
将以上成分溶解于蒸馏水中，分装16mmX150mm试管（管内有倒立的小发酵管），每管8mL。121℃高压灭菌15min，最终pH6.9士0.1。A.7
伊红美蓝琼脂（EMB）
蛋白陈
磷酸氢二钾（K,HPO4）
伊红（水溶性）
蒸馏水
0.4g或2%水溶液20mL
0.065g或0.5%水溶液13mL
在1000mL蒸馏水中煮沸溶解蛋白陈、磷酸盐和琼脂，加水补足至原量。分装于三角烧瓶中。每瓶100mL或200mL，121℃高压灭菌15min。最终pH7.1土0.2。使用前将琼脂融化，于每100mL琼脂中加5mL灭菌的20%乳糖水溶液、2mL2%伊红水溶液和1.3mL0.5%美蓝水溶液，摇勾，冷至45℃～50℃倾注平血。
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）A.8
蛋白陈
酵母膏
氯化钠
胆盐或3号胆盐
中性红
结晶紫
蒸馏水
15.0g~18.0g
SN/T0169-—2010
无需高压灭菌。将上述成分溶于蒸馏水中，静置儿分钟，充分搅拌，调至pH7.4士0.1。煮沸2min，将培养基冷至45℃50℃倾注平板。临用时制备，不得超过3h。A.9LST-MUG肉汤
胰蛋白陈或胰酪陈
氯化钠
磷酸氢二钾（K,HPO）
磷酸二氢钾（KH,PO）
月桂基硫酸钠
蒸馏水
将各成分溶于蒸馏水中，分装试管（内装倒立小发酵管），每管10mL。121℃高压灭菌15min。最终pH6.8±0.2。
Columbia-MUG琼脂培养基
胰酪陈
水解蛋白
酵母浸膏
牛肉浸膏
可溶性淀粉
氯化钠
蒸馏水
将各成分溶于水中，无需调pH值。121℃高压灭菌15min。冷却至55℃～60℃.倾注平板。A.11
蛋白陈-吐温80稀释液（PT）
蛋白陈
吐温80
蒸馏水
将上述成分加热溶解分装90mL于三角瓶中，121℃高压灭菌15min。9
SN/T 0169—2010
乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂（LMG）胰蛋白陈
蛋白陈
酵母膏
莫能霉素
苯胺蓝
葡萄糖醛酸钠盐
硫酸十七烷基钠盐
蒸馏水
0.038g（于95%酒精10mL溶解）
无需高压灭菌。加热煮沸，温度冷至45℃～50℃无菌操作，调整pH最终为7.2士0.1。倾注平板，打开血盖在35℃士1℃温箱，15min20min烘干备用。3缓冲MUG琼脂（BMA）
磷酸氢二钠（Na2HPO）
磷酸二氢钠（NaH,PO）
4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖苷酸（MUG）琼脂
蒸馏水
溶解加热煮沸，调整pH7.2~7.6，121℃高压灭菌15min。温度冷至45℃～50℃，倾注平板。A.14
4Tris缓冲剂（1.0mol/L）
溶解121.1g三（羧甲基）胺甲烷于500mL水中，用浓盐酸调节溶液至所需pH值。用水稀释至1L。于4℃～6℃保存。
5营养琼脂斜面
牛肉膏
蛋白陈
蒸馏水
将各成分于蒸馏水中煮沸溶解。分装合适的试管。121℃高压灭菌15min。最终pH7.3士0.1。灭菌后摆成斜面备用。
6色氨酸肉汤
胰陈或胰酪陈
蒸馏水
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