【行业标准】 冬生疫霉病菌检疫鉴定方法

中华人民共利和国出检验检安行业标准S/H 26 17--2010
冬生接究城南检胶鉴定方法
Deteete akel ceanfhiahi sr Hveaphrarrn nebermrelis Cnrt20*0-05-27 发布
国家顾服局
数码防伪
含品伙伴网ht
2010-12-1
本标雅按照31-20给用的规用草
本标准中南家认证认可监督驾理交风会，中！标雅起草位中科检验检技科“研学隔本标雅主要提草人是品斯格洪康http：//foodmate.net8N/261/2010
各件#医网检婚家方法
SN/T2517--2010
本标证观定了征物检疫巾多疫募效量vobhorahienalisarue的检度鉴定方法。本标难造用于针射冬生按难氧价！为商不，战多，转听，果实以及火带上爆中的冬生疫舒病菌检疫鉴定
2随理
根据多生疫赛病闲寄点内症获，学产装征和特界相扩增片段为鉴定依据，该病离的具1霜美资得希见附4
3，1生物最微镜，体视能微德。3.？光照生物培箱
.3高尿成菌器。
高速离心桃
求增仪，电泳仪，凝胺成像仪
斌帝、财料和培养基
.1就剂
1.1所马素，利福平：来，军2鹤（）已谷附。氮酸，碳氨，条化饼al,欣激酸谢ao：
1球脂糖3D+“烷满硫酸钠），！：氯化钱裁骏TA（Z二胺四之酸四钠格）前机化钠，之酸钠，氯低钠，『A六烧甲张源化，A上，请小醇，娃酚，三氯中蔬，驿内醇。呼醇Yrn！核。
A.l.自K，agyDNAnolyneradNtPnA分fMarker4.1.4PCR物FIH/PHIE2
琼V液，雪松密被（叶片胡尊，米汕.3牌靠撼
求标准所用的增养基馨见附源
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/26-210
5鉴定方法
5.疗账检查
惠点观柑橘果实是否台补色宽专中#款刘鹏温随物：视察，片是香有深褐色病斑，邀个叶片和柄变两，改受害状效部排小科落部漆紫位创黑色病斑：其他寄！为根部痛烂成溃烧：参克约景A，
5.分鼠培辨和诱集
2.”会离培养
拍物根，组织流水下冲送～1.在病健交界处或变色部位切取边良5mm~10的样品，州菌然纸吸「水分，激于择迎培球」取结榴采实农必植物叫许等其性能阻实界处mum.无菌水冲洗淡，灭菌滤纸吸十水分，教于选铎培养基上，度H：法氧酸纳消藻2mmn，信菌水洲洗3次，灭菌练现破！分·放下胡数千约培养基或缔释的鼓1倚的8培养1：18%20℃黑嗒培养！底-2周，妈有真菌菌落中现到培养基116℃-20℃17h光125张喀培养。
5.2.2上诱集
致取5员壤成介质：德融辞，宏车放人识风就杯中，加入无菌水将士壤或介质润湿，时门胃于1℃20黑唯效宜
5d-7d后烧杯中前人火菌水，使水层高-0让。取酱松松钾成树橘叶片，无菌水清洗后源放在水面或没在水中，6℃诱架，
2小~3d后十始签化，最有久绿或变色拉计成计，水冲洗，灭茵滤纸吸十水分、放干选拌性：培养基吸期岁下丝培养基点162℃紧陪培养1周…周2驰平密培养
将长石分离菊的VS培养县成小樊，敬有成菌书产川中加人少许灭随水培养基我南有游离水，0%光照培养小2：片斌率，如有独子囊生版将培养血效置，潮察游动孢了产生。5.2.牛翊瘤下培养
将分离闹转歪了培养是上：，产亲期鸡繁有不卵独了形成，5.3分下生物学鉴定
5.3.1 *A提取
最似产主秘物病凯织或集分内点自琴油，，点比法提核参见附录5. 3.2检测
Peas的格法附
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5鉴定标准
菌落格征
SA/ 2817-.-201C
在V8：音养其上生长选度较慢4mm-：品游单贴车中证的超松，量致燃花状花状区城较富川国.
6.2病原膨粥
只版的强产遵长卵圆形择同后照留，带书较的拍囊的，顺部具有不完个的乳头状突施，通滑激部筑形，倾部斯平乳然最宽。我子装小25m53）（11~22：单340um×19pm）长满比较大为1.8~2.1年 21),密纳 22~73 μe
狗攀种不分枝或华的长分核：减总地不期训他试炫谢技：独子葱银露明发释放游新独了，病菌不产小厚拍独子，段动随丝魔人像we为同家顺合，颜器签用准假生，离0，卵敢橙色，满器·大小为22m~16平均30mm）原1m--3m人小为22m66均3mm）形盗图象见随录D
3与斯该种的形态医别
客要孵与「香瘦舞（在州点根相似要区别为冬生疫菌落的花区感较窗，泡子掌易脱落狗下度柄，雄器惠小，丁香疫霉幽落的花源区城夜火笨，孢子瑟不脱部就端家侧生：见附录节
特激性产赖
引物H2的界片股0/
缩到实
根探馨冬出疫毒就菌的鉴定标雍（见第6意），为分刘萄进行综合判定。如分高隔的所有特性均与备鉴定指标合可鉴定为急生疫签病商（hoorAeaCa）。8茵独保藏
将分离闲接在席亲，等国落满为妞1小牌。效在有无菌水的试管中，封好，密凯保存，或将分离菌夜件培等基的南：科表而布微闲丝片，封好斜所的盖子罩子0C保荐。
必要时内专家对检测结巢进行家场，htt
S/F2617--2013
南。！分效地信
资科州
各牛安商临源的资料
零病游（ih：：带萄（hyrliomyron，菌纲Conmyeten）得Py：inleup/wophthoradcBary)A2宽正范围
病南主要为害动酒（3中值垫.科楼等，起果实褐滴：还可假染研椒(tapcuw annnn I.,),tloer e.rnra t,n +kgedanun nelongeno T.巢(Mules mnataMill理（Roco）Fhhfarm.解（Sesanum indirwn[红花ttnrthets tietorirs J, J.l Hhet Tger.tirtt. Aalus. FT 松(Chanahtyparis tevsoniann)等·造成种求磨成汉场
人，3害疯狱
可导效借摘只实富！隧楼学新啥加获健染初期，果实表皮出现游色变色感第位版质坚，就票请合证长单终车事果实肤许具竭鼎床。见图A。和属器植物受与的状为印片双台形业圆病斑，病斑可与展例疆个引片白叶俩致逸整害痛快为中解霜小砖验理机：专深战制包视离病奥处红深视鱼到照也P.动ema可品敏带果，器有确和三想报码性贝市杉自香松产既溃疡疗状::
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2/261--2010
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.1vS 培养基
（资调盈）
8液10m加入5微龄钜签佛款0mk菌R.足胡萝卜丝培养基CPA
胡剪下切丝.5g琼脂.1ri热增.菌。.3选择性培养基所R强
177ml.过滤后的V8滋，加人3.5g碳骏钙15惊骼，900ml蒸铅水.火菌元冷却到50，加人匹赛素0.005起、利福平钠谢0,心25g、苯灵0.01g恶灵0.005g：既4卵孢于培养基
V3液经400u/mim离心201取清泌77m1.入0.03g谷留醇，0.02g色氨、0.1氯化钙，0.001硫氮和15g琼脂，加人蒸谱水1100mI，灭菌后冷却到50，入下浓油12Lhttp：
TEITEAT
摄眼方法
合密理限）
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样品为似微主植物病机烈传将特年流净消减以成小大，冷冻加液氮研察效人15m.离心管中诗用，样品为真菊州，收煲菌丝浓人！、心，没在液氮里的离心管中，用兜料格候碎待。离管人3000A级藏（送等01蛋白嗨K混，6水浴13000离心5m-10m保留上清没，加500l.Tns饰租骏：三氯甲烧：成擎体积为2：4：）混约，130ocg离in-omin保率游液，呼.氛烧：异成醇（体积为241）混句13co0g离510mi保留上液·用，内舒源年。7下效置1h或-20过夜，13000g离心ONA沉?牌NA滋家温十燥：S0TriFTA缓冲液溶解NA符用.
3 2联检测
性物PIBIHI的库创5TCCGGTCTACTAGTAGYCTT“租GIICGACAACAATTGATATH
25，拍反应体系有样品1A11双微冲激2.5.23mmol/氛化镁2l，2.5aml/.nNTP. % pL, lo urmol/l. Frimtr: o. s l./o j i., 5U/uL. Ta DNA pedyinerape o. 2 μl. ridllh. 3 ..
夜成款祥为2430830615，35个循环721Gmin在1xAF口泳缓冲液中.15系惊腾实穿3Erenm1核染料）凝胶电泳.5V/en断胶成像仪分析靠
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8NC×12301/J6印张1享数17于F字2013年16月第，版2010年101第次印刷 1-」 60m
号：1356622:230#价1.00元

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